蛋白免疫印迹(western blot，WB)检测技术相对于ELISA和其他基于抗体的检测方案而言，更易于操作，并且可以提供有关蛋白质大小的信息，因而其广泛用于样本蛋白表达水平的定量检测。然而，随着WB技术应用的日渐普及，近来科学家们对提交给同行评审期刊的WB数据的重复性和可靠性产生了担忧。2014年，美国国立卫生研究院与《科学》和《自然》期刊以所发表科学数据的重复性和透明度为主题，携同其他出版商和科学家组织了一次会议。通过这次合作，制定出了一系列指南文件。会议聚焦的特定领域之一涉及基于图像的数据，如蛋白免疫印迹，并就此提出了许多改进建议。会议结束后，许多期刊针对WB数据制定了更严格的审查指南，修订了它们关于提交WB数据的说明。

研究者在向国际期刊投稿中涉及凝胶或WB图像时，通常的做法是裁剪凝胶或 WB图像，裁剪过程会去掉图像中无关的部分，只呈现感兴趣的蛋白质。凝胶和 WB图像的裁剪可能会出现问题。期刊如果检测到凝胶和WB图像出现重复特征或应用了不适当的编辑，就会对图像的完整性提出质疑。当图像的某些部分(如特定条带或染色道)被裁剪、提取，然后粘贴到图像的另一个区域时，就会出现这种情况，这通常被称为拼接。对原始凝胶或WB图像进行不恰当的裁剪会改变从图像中得出的科学结论。最好的做法是保存未经裁剪的原始采集图像文件，应要求共享，以保证实验结果的真实性、可靠性、可复制性、完整性、科学性。

在对含有裁剪凝胶和WB图像的稿件进行质量检查时，很多杂志要求作者提供原始图像文件，以便进行评估。

作者应将感兴趣的蛋白质正确标注在这些原始图像文件，并与稿件中的图像保持一致。虽然在稿件中加入裁剪过的 WB图像以包含相关蛋白质是常见的做法，但如果裁剪有问题、未声明裁剪或条带重复，会引起期刊的关注。在这种情况下，期刊将要求作者提供原始保存的图像文件以供评估，并以防止未来读者提出质疑。这也有助于提高期刊的质量，并对科学家产生积极影响。

那么应该如何正确提交无裁剪的原始WB图片呢？可以考虑从如下几方面着手。

- 图像不应过度覆盖感兴趣的条带。图板应在条带上方和下方包含一些背景区域。原始图像中的任何非特定条带都应包含在图中，并在文本或图例中加以说明。

- 进行条带间比较分析时，应在同一凝胶/印迹上跑所有相关样本。

- 每张图都应包括所有相关的对照，如有必要，对照样本应与实验样本在同一印迹或凝胶上跑胶。

- 图片不应包括来自不同印迹、曝光或凝胶的条带合成图像。如果需要用来自多个印迹或凝胶图像的数据来说明结果，则不应将不同图像拼接在一起；应将它们明确区分为图中的单独板块，并在图例中注明它们代表不同的凝胶、印迹或曝光。

- 如果在绘制图表时对单个印迹/凝胶图像中的泳道进行了重新排列，则应在图表上用垂直黑线清楚标明图像拼接处，并在图例中注明这些泳道代表不同的凝胶、印迹或曝光。

-强烈不建议对不同凝胶/印迹上的样本进行定量比较；如果不可避免，则必须在图例中说明样本来自同一实验或平行实验，且凝胶/印迹是平行处理的。

-对于凝胶中不相邻的重新排列的泳道，必须以划定泳道之间界限的方式清楚标明。重新排列的泳道应在图例中注明。

-上样对照(如 GAPDH，actin)必须在同一印迹上进行。如果样品处理对照在不同的凝胶上进行，则必须在图例中注明。论文中裁剪过的凝胶必须保留所有重要条带。

-不鼓励使用高对比度凝胶和印迹，因为过度曝光可能会掩盖其他条带。

- WB重复的结果应提交以供审查。重复的次数应在图注中清楚地标明。

提交WB原始图片的格式要求：

- 创建一个PDF文件，其中包含稿件主图和补充图中的所有印迹和凝胶原始图像。建议使用图像软件(如Photoshop)编译和注释原始图像，然后以 LZW 压缩方式导出/保存为 tiff 文件。也可以使用 PDF 将多个带注释的 jpeg/tiff 图像文件编辑成一个 PDF 文件。不建议在 PowerPoint 中编辑图像，因为这样会丢失分辨率。

- 文件应命名为“S1_raw_images”，并作为“补充信息”文件上传或存放在合适的公开数据存储库中，并在 “数据可用性声明”中提供数据集标识符(DOI 或其他形式的持久性标识符)。

- 作者应为每张原始印迹或凝胶图像贴上标签，以清楚地注释加载顺序、实验样本的身份、捕获图像的方法，并说明哪张图板是由该原始图像生成的。原始图像上应包含或标明分子量标记，最终图中未包含的任何泳道应在原始印迹/凝胶图像的泳道标记上方标注“X”。所有标记和注释均应在不遮盖任何数据或背景条带的情况下进行。

-正文选用的条带来自于原始图片的哪些条带最好用方框标示。

作者在提交稿件时应注意以下几点：(1)检查图片是否重复；(2)检查印迹和凝胶是否拼接了泳道；(3)确保提供的原始图与正文图片相符。

 

无裁剪的原始WB图片范例如下：