国自然的前期“工作基础”部分常见存在的问题

时间 : 2023-03-29

 

国自然的前期“工作基础”部分,也是国自然项目判断延续性最重要的部分。

 

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需要注意的是,该部分有两个关键点:

  • 与本项目相关的研究工作积累

  • 已取得的研究工作成绩

 

那么我们就今年审阅的几百份标书,总结出来的“工作基础”问题给大家陈述一下:

 

(一)预实验体量不足

这个问题最为突出,可想而知,本身作为临床医生,科研只是附带做做,哪有精力跟大家一起“卷”,所以最后形成的本子中的预实验,往往只有大量的“生信图”和少量的柱状图、WB结果。

 

而除了精力问题导致预实验不足以外,还有一个认知问题也很严重,就是申请人设计的国自然假说太简单导致,殊不知别人的本子不仅思路“卷”、预实验也“卷”,所以这就导致“瞎子摸象”的困局,始终摸不到国自然的“真象”,那么距离国自然中标也就十分遥远。

 

为什么预实验要足够多?①专家挑刺时,不会以证据链不足秒杀你;②预实验多可以弥补一下“文章不够好”的短板;③预实验多,证明你花了很多经费,那你并不是白嫖的态度来对待国自然,专家也能看到你的努力。

 

有些童鞋会问:会不会因为预实验多,专家觉得你都做完了而不予资助?

既然国自然本子包含多方面顾虑,存在各种心理维度的博弈,青椒哥在面对这个问题时,更愿意相信专家喜欢“预实验充足”的本子。

 

两害相权取其轻,永远是国自然本子的正解。

所以预实验应该包括3-4张组图:

① 第一张:证明你的细胞系和动物模型,成功;

② 第二张:生信分析、分子信号轴关键分子和临床问题的相关性,验证关键分子在临床样本、细胞系和动物模型中的表达趋势;

③ 第三张:过表达或者沉默干预后,观察细胞和动物模型的表型,检测一下XXX通路的激活情况;

④ 第四张:数据库预测以及分子对接分析;加一个分子互作的实验图,证明分子机制的假说成立。

 

(二)图注(legend)不详实

字面意思,就是图注缺失,或者描述过于粗糙,没有介绍单图的实验方法和分组情况。

 

(三)对照组缺失

对照组包括空白对照、阴性对照、阳性对照,但一般来讲,至少要有阴性对照,空白对照可以忽略。阳性对照大部分情况不是必须的,但是药物实验中阳性对照却是必须的。

 

而过表达和敲低这种实验,阴性对照组一定需要,切不可省略。一般用“空白质粒”“scrambles”“sh-NC”“si-NC”“Mock”作为阴性对照组。

 

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(四)内参前后文不一致

全细胞WB内参一般有GAPDH、β-actin、β-tubulin等,但有时候因为代表作属于早几年发表的,所以和现在预实验之间的内参可能会存在差异,这种都可以理解,但最好是内参保持一致。但有时候同一批预实验中内参也有不一致的情况,还望前后保持一致。

 

(五)没有统计显著性标注

预实验按理来讲都是要做到技术性重复和生物学重复,因此每个实验务必形成一个统计学分析结果,并且附带显著性标注“***”“ns(不具有统计学意义)”等。

当然如果预实验太多,可以选择性进行统计分析。

 

(六)WB条带背景不均一或者分子量(kDa)没标注

有些WB看起来比较假,因为背景不均衡,不均一,像是不同实验条件下产生的,而且有时候单图的边缘有明显的的切割的痕迹。

另外一个经常出现的问题就是:WB结果不标注分子量。这不是一个特别规范的学术行为。

 

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(七)分子机制的结果缺失

分子机制的证据链往往成本很高,毕竟CO-IP、pulldown、ChIP、荧光素酶报告实验等的成本不低,而且往往做了也不一定有阳性结果,所以很多本子并没有放分子机制的预实验结果图,这也是很多国自然本子的通病之一。解决方案就是用数据库预测、motif预测、各种炫酷的分子对接分析来弥补了。

 

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(八)肿瘤本子预实验只有一株细胞系

强烈建议肿瘤类的本子,预实验中最好使用两株细胞系做功能实验,并且肿瘤类的本子一定含有体内实验。

 

(九)已取得工作成绩部分

已取得工作成绩部分要简明扼要,一般的格式是

  • 一段话介绍一下自己的科研经历,可以提一下自己的大牛导师;

  • 然后列出自己的代表作文章,并标注一下作者位次以及中科院分区;

  • 挑2-3篇文章,把重要的实验结论(或者文章的机制图)放一张出来,简单描述一下